上海ELISA試劑盒滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型成為有色的氧化型，ELISA檢查試劑盒出現(xiàn)色彩反響。因而，可通過底物的色彩反響來斷定有無相應(yīng)的免疫反響，色彩反響的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。
上海ELISA試劑盒測(cè)定方法中有三個(gè)必要的試劑：
?。?）固相的抗原或抗體，即"免疫吸劑"（immunosorbent）；
（2）酶符號(hào)的抗原或抗體，稱為“酶聯(lián)物"、“聯(lián)絡(luò)物"（conjugate）；
?。?）酶反響的底物。依據(jù)試劑的來歷和標(biāo)本的狀況以及檢查的具體條件，可規(guī)劃出各種不同類型的檢查方法。
ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所致使的盛行癥、ELISA檢查試劑盒寄生蟲病及非盛行癥等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定，依據(jù)現(xiàn)已運(yùn)用的作用，認(rèn)為ELISA試劑盒法具有活絡(luò)、特異、簡略、敏捷、安穩(wěn)及易于自動(dòng)化操作等特色。
有的試劑盒中所設(shè)陰性對(duì)照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，致使反響后發(fā)作的本底或許較正常人血清的本底低得多。
上海ELISA試劑盒在實(shí)驗(yàn)條件（包括試劑）較難保證安穩(wěn)的狀況下，這種差異法較為合適。
ELISA試驗(yàn)時(shí)，注意事項(xiàng)如下：
1.正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)別離以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說明有非特異性反響，可采用羊血清、兔血清或BSA等關(guān)閉。
2.在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)試驗(yàn)條件的挑選是很重要的，其間包含：
?。?）固相載體的挑選：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方法可所以凹孔平板、試管、珠粒等?，F(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體，在運(yùn)用前均可進(jìn)行挑選：用等量抗原包被，在同一試驗(yàn)條件下進(jìn)行反響，查詢其顯色反響是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否出色。
?。?）包被抗體（或抗原）的挑選：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有必定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相一同，查詢陽性標(biāo)本的OD值。挑選OD值大而蛋白量少的濃度。關(guān)于大都蛋白質(zhì)來說一般為1～10μg／ml。
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更新時(shí)間：2019-09-18 
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