ELISA檢測試劑盒常見問題處理 |
出現(xiàn)問題 | 出現(xiàn)問題的原因 | 解決辦法 |
曲線 | OD值不正常 | 試劑盒未回溫 | 試劑盒回溫到25℃ |
溫度控制不好 | 控制正確溫度 |
孵育時間不準確 | 控制孵育時間 |
洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增加 | 洗滌4-5次,每孔250ul,然后拍干 |
陽光直射,對著風直接吹 | 避風避光 |
酶標儀的波長錯誤 | 酶標儀的波長450nm |
抗體的稀釋錯誤 | 正確的稀釋抗體 |
水質(zhì)問題 | 用娃哈哈礦泉水代替 |
白 板 | 洗滌液配制錯誤 | 正確的配制洗滌液 |
少加液體(抗體、酶標記物、A液、B液) | 正確的步驟加液體 |
錯加液體 | |
無 梯 度 | 標準品也污染 | 換標準品點板 |
OD值不正常 | 控制溫度時間在做一次 |
人為點板 | / |
線 性 不 好 | OD值不正常 | 控制溫度時間在做一次 |
人為點板 | / |
回 收 率 | 空白管陽性高 | 樣本本身就是陽性樣本 | 換陰性樣本做回收率 |
空白管在實驗中被污染 | 實驗中防止交叉污染 |
水質(zhì)原因 | 用娃哈哈礦泉水代替 |
偏 高 | 添加量不準確 | 的添加量 |
添加濃度不適合 | 添加合適的濃度 |
取液吹干量多 | 準確的取液吹干 |
取到其它相層液體 | 取需用相吹干 |
復溶液未稀釋或加入量少 | 正確的稀釋復溶液 |
偏 低 | 添加量不準確 | 的添加量 |
添加濃度不適合 | 添加合適的濃度 |
取液吹干量少 | 準確的取液吹干 |
復溶液稀釋錯誤或加入量多 | 正確的稀釋復溶液 |
假陰、陽性 | 水質(zhì)原因 | 點復溶液驗證 | 用娃哈哈礦泉水代替 |
實驗操作原因 | 吸取到其它相吹干 | 準確的取液吹干 |
離心不* | 延長離心時間 |
樣本的污染 | 更換樣本 |
乳化未處理* | 溫?。?0℃)處理乳化現(xiàn)象 |
儀器試劑原因 | 離心管未清洗干凈 | 正確的洗滌器具 |
有機溶劑的影響 | 做試劑空白看影響結(jié)果 |
衍生化試劑原因(長時間衍生化試劑變質(zhì)) | 更換衍生化試劑 |
與曲線好壞相關(guān) | 保證曲線的正常 |
金標檢測(T)線顏色較淺 | 尿液pH偏堿性 | 用0.01M HCl調(diào)節(jié)尿液pH值到7.0左右。 |
尿樣滴加過多 | 重新測定,尿樣按照說明書,控制在2滴 |
尿液過于混濁 | 將尿液離心后,取上清液重新測定 |
金標質(zhì)控(C)線不出現(xiàn) | 檢測卡由于高溫、受潮等原因失效 | 尿樣需要重新檢測。 |
過了有效期失效。 | 該批號的金標應丟棄處理,尿液需要重新檢測 |
操作過程中檢測卡沒有平放,導致液體樣品直接沖過檢測區(qū) | 尿樣需要重新檢測,且檢測卡平放于桌面上再加樣。 |
尿液樣品中含有較高的抑制或者干擾抗原抗體反應的物質(zhì)(比如明礬、小蘇打、氧化劑、肌酐等) | 該尿液的檢測結(jié)果無效 |
金標卡上在除了T和C線之外的其他地方出線 | 金標卡上的劃痕;膠體金在跑板過程中沒有*跑干凈而在卡上的痕跡; | 該檢測卡結(jié)果不可信,尿液需要重新檢測。 |
實驗重復性不好 | 操作人員的不一致,取樣的不一致,樣本數(shù)量的多少,加樣時間的長短,洗滌條件不一致,加樣量不一致 | 盡量保持的實驗一致性 |
分析軟件的使用 | 不能設(shè)置和保存 | 正確的設(shè)置和保存 |
如何判斷曲線的好壞和分析結(jié)果 | 正確的判斷曲線的好壞和分析結(jié)果 |